Abstract

SYEDD-LEON, Randall et al. Revisão dos fundamentos da análise do p-nitrofenol para sua aplicação na quantificação da atividade da lipase. Uma atualização gráfica. Uniciencia [online]. 2020, vol.34, n.2, pp.31-43. ISSN 2215-3470.  http://dx.doi.org/10.15359/ru.34-2.2.

O p-nitrofenol (pNP) é um composto amplamente utilizado para a determinação analítica de esterases (EC. 3.1.1.X), incluindo lipases (E.C. 3.1.1.3). A maioria das medições enzimáticas utiliza seus derivados, como ésteres, que se decompõem por hidrólise, liberando pNP quantificado por sua absorvência a 410 nm. Embora esses tipos de métodos tenham sido desenvolvidos há algumas décadas, a análise espectrofotométrica de pNP requer medições precisas de pH e temperatura para obter determinações confiáveis. O objetivo deste trabalho é oferecer uma atualização gráfica de como o pH e a temperatura afetam a absorvência do p-nitrofenol em diferentes longitudes de onda em meios emulsionados para ensaios de lipase, devido a sua relevância para a determinação quantitativa da atividade das lipases sob métodos espectrofotométricos. Para destacar a importância de cada variável nesta análise, o pNP foi dissolvido em meio emulsionado (para quantificação da atividade da lipase) em vários valores de pH de 4,00 a 11,00 e sua absorvência foi medida na faixa de 270 nm a 500 nm a várias temperaturas na faixa de 25 °C a 50 °C. O comportamento químico do pNP nessas condições foi correlacionado mediante a construção de gráficos tridimensionais. Como resultado, os gráficos 3D construídos experimentalmente mostraram que, independentemente da temperatura, abaixo de pH 6,00, o pNP absorve principalmente a 317 nm, devido à maior abundância de sua forma protonada, que é completamente predominante em pH 3,50 e inferiores. Por outro lado, o pH 10,0 e superiores, o equilíbrio muda completamente para a forma aniônica pNP, que absorve a 410 nm. Nossos dados confirmam que em valores de pH próximos à neutralidade, o pNP mostra um efeito de dependência da temperatura, aumentando a absorvência a 410 nm em temperaturas mais altas. Em virtude de muitas determinações quantitativas de atividades enzimáticas, o pNP é liberado em um meio de reação de cerca de pH 7,00. É necessário lembrar o papel determinante do pH e da temperatura nessas medições e como essas variáveis ​​devem ser estritamente consideradas.

Keywords : p-nitrofenol; lipase; absorvência dependente do pH; dissociação dependente da temperatura; espectro de absorvência 3D; pH; longitude de onda.

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