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Resumen

El objetivo de este  trabajo fue la identificación morfológica y molecular de T. palmi en cultivos de cucurbitáceas en Panamá. Los especímenes fueron colectados en las provincias de Los Santos, Herrera, Coclé, Veraguas y Chiriquí, del 17 de febrero de 2009 al 17 de agosto de 2010. La identificación de los insectos fue realizada en el Laboratorio de Protección Vegetal (LPV), del Centro  de Investigación Agropecuaria Central (CIAC), del Instituto de Investigación Agropecuaria de Panamá  (IDIAP), ubicado en Los Canelos, distrito de Santa  María, provincia de Herrera, Panamá. Los especímenes fueron identificados mediante morfología  utilizando claves taxonómicas. Se utilizó la reacción  en cadena de la polimerasa (PCR) con cebadores específicos de T. palmi, los cuales amplifican el gen mitocondrial de la citocromo oxidasa subunidad I (mtCOI). Se obtuvieron amplicones (productos de PCR) del tamaño esperado (220-pb) correspondientes a T. palmi. Adicionalmente, un  producto amplificado fue  purificado y secuenciado. Para verificar la identidad del insecto, la secuencia obtenida fue analizada con ayuda del Instrumento de Búsqueda de Alineamientos Locales Básicos (BLAST) y comparada con secuencias de referencia del Centro Nacional para la Información Biotecnológica (NCBI).

Palabras clave: claves taxonómicas, cebadores  específicos, identificación morfológica,  identificación  molecular, PCR, secuenciación.

Abstract

The objective of  this  work  includes  the  morphological  and  molecular identification of T. palmi in cucurbit crops in Panama. The specimens were collected from the provinces of Los Santos, Herrera, Coclé, Veraguas and Chiriquí, from  February 17th of 2009 until August 17^th of 2010. The insects identification was realized at the Laboratory of Plant Protection (LPV), of Agricultural Research Center Central (CIAC), of Agricultural Research Institute of Panama (IDIAP), located in Los Canelos, Santa María district, Herrera province, Panama. The specimens were identified by morphology using the taxonomic keys. The polymerase chain reaction  (PCR) was used with T. palmi specific-primers,  which amplify the mitochondrial gene  cytochrome  oxidase  subunit  I  (mtCOI).  Amplicons (PCR  products) of the expected size (220-bp) were obtained from T. palmi. Furthermore, an amplified  product was purified and sequenced. To verify the identity of the insect, the sequence obtained from it was analyzed using the Basic Local Alignment Search (BLAST) and compared with reference sequences from the National Center for Biotechnology Information (NCBI).

Key words: taxonomic keys, specific-primers,  morphological  identification,  molecular identification,  PCR, sequencing.

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Introducción

La familia Thripidae  comprende 260 géneros y cerca de 1850 especies, mientras que el género Thrips contiene más de 200 especies a nivel mundial. Thrips palmi Karny  (Thysanoptera:  Thripidae)  es una especie de plaga polífaga, especialmente  de cucurbitáceas y solanáceas.  Esta especie  es  originaria del sur de Asia, y, actualmente,  se encuentra  muy extendida en América Central y el Caribe. Sin embargo, se presenta de manera localizada  en Norte y Sur América, África y Oceanía. Adicionalmente,  se han reportado varios brotes en Holanda y un brote en Reino Unido, los cuales fueron erradicados. Por lo tanto, esta plaga no está presente en Europa (OEPP/EPPO 2006), según la literatura consultada.

En Panamá, la presencia de T. palmi se reportó  en el año 2006, en un cultivo de sandía [Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai] ubicado en la localidad de Los Chicharrones,  distrito de Chitré, provincia de Herrera, al suroeste de Panamá. El Ministerio de Desarrollo Agropecuario (MIDA) de Panamá, a través del resuelto Ministerial No. DAL-028 (de 18 mayo de 2006), establece una serie de medidas cuarentenarias tendientes a evitar su establecimiento  a nivel nacional, declarando zonas de baja prevalencia, así como localidades libres de esta plaga, con base en la normativa vigente (MIDA 2006).

Thrips palmi causa daños significativos en cultivos hortícolas en diferentes regiones del mundo, por ejemplo, en México se reportan  daños de 5 a 80% en sandía, y 50 a 90% en berenjena (Solanum melongena L.) y pepino (Cucumis sativus L.) (OIRSA 2011). Adicionalmente, esta plaga está incluida  en la lista de alerta de la Organización Europea y Mediterránea de Protección a las Plantas (EPPO) (OEPP/EPPO 2006) y del Sistema de Alerta Fitosanitaria de la Organización Norteamericana  de Protección  a las plantas (NAPPO) (NAPPO 2004). Por lo tanto, podría causar importantes pérdidas económicas en cultivos de exportación como melón (Cucumis melo L.), sandía, zapallo (Cucurbita moschata L.), y pepino, debido a la restricción de estas hortalizas  en los mercados internacionales.

Además del daño causado por T. palmi al alimentarse de las plantas,  este insecto  tiene la capacidad de ser  un vector de diferentes  especies del género Tospovirus, entre ellos, el virus de la mancha clorótica del lirio cala (Calla lily chlorotic spot virus, CCSV; Chen et al. 2005), virus de la necrosis del brote del cacahuate (Groundnut bud necrosis virus, GBNV; Reddy et al. 1992, Lakshmi et al. 1995, Meena et al. 2005), virus de la mancha amarilla del melón (Melon yellow spot virus, MYSV; Kato et al. 2000), y el virus del moteado plateado de la sandía (Watermelon silver mottle virus, WaSMV; Iwaki et al. 1984), citados por Riley et al. (2011).

La identificación morfológica ha sido usada tradicionalmente para identificar y diferenciar T. palmi de otras especies de trips. Sin embargo, existe cierta similitud de T. palmi con otras especies, entre ellas, Thrips alatus y Thrips pallidulus (Palmer 1992). Por lo tanto, realizar un diagnóstico hasta nivel de especie es bastante difícil, ya que los caracteres utilizados en la taxonomía  muchas veces se ven afectados por la manipulación  de los individuos,  además de la necesidad de personal capacitado y claves taxonómicas especializadas (Rugman-Jones et al. 2007, Hoddle et al. 2008, Mound et al. 2010). Estas claves tienen la limitante que solo permiten la identificación de especímenes adultos, no así estados inmaduros  (huevos,  larvas  o pupas) (OEPP/EPPO 2006).

Las técnicas moleculares se basan en las características  genotípicas  de un organismo,  las cuáles son estables, y las mismas pueden ser utilizadas  para identificar todas las etapas del ciclo de vida del insecto (Kox et al. 2005). Por lo tanto, el empleo de estas técnicas, por ejemplo, la reacción en cadena de la polimerasa (polymerase chain reaction, PCR) en la identificación de T. palmi (incluso en estados inmaduros y en especímenes incompletos),  representa una alternativa rápida y confiable que permitiría analizar simultáneamente un gran número de especímenes, por ejemplo, en los programas de control de especies de trips que han adquirido  resistencia a los insecticidas (IPPC 2007, Mound y Morris 2007), citados por Rodríguez-Romero et al. (2011). Adicionalmente, la PCR podría ser empleada para detectar oportunamente T. palmi en los puertos de entrada de Panamá y evitar su re-introducción al país, debido  a que este insecto por su diminuto tamaño a menudo pasa inadvertido a través del comercio de vegetales, frutas y plantas ornamentales,  especialmente en sus  estados inmaduros (Rodríguez-Romero et al. 2011).

El presente estudio tuvo como objetivo la identificación morfológica de T. palmi en cultivos de cucurbitáceas en Panamá, así como la identificación molecular como una alternativa de diagnóstico.

Materiales y Métodos

Localización geográfica del estudio

Los trips fueron colectados  en trece diferentes localidades de las provincias  de Los Santos, Herrera, Coclé, Veraguas y Chiriquí (Panamá), en el  periodo comprendido del 17 de febrero de 2009 al 17 de agosto de 2010 (Figura 1, Cuadro 1).

Las localidades  se georeferenciaron  con un GPS portátil GARMIN Etrex Legend®, obteniendo datos de latitud, longitud, y altitud, los cuales se mapearon con el programa ArcGIS® v9.3 (ESRI 2008).

Colecta de trips

Se colectaron  1023 especímenes adultos de trips en distintas especies de cucurbitáceas (melón,  sandía, zapallo y pepino), así como también en un cultivo de chayote  [Sechium  edule  (Jacq)  Swantz], con ayuda de aspiradores, paneles o placas blancas y mediante golpeo enérgico sobre brotes terminales y flores, debido  a que en estas partes de la planta  es donde se concentran  estos insectos (Goldarazena  et al. 2012). Posteriormente,  fueron recogidos  con ayuda de un pincel humedecido con alcohol al 75% o de un aspirador, y se depositaron  y preservaron en viales de 2 ml conteniendo igualmente alcohol al 75%. A cada vial se le asignó un código, el cual incluía la localidad, cultivo y fecha de colecta de los insectos.

Los especímenes fueron utilizados en la identificación morfológica, y además se utilizó la identificación molecular en el caso de T. palmi, tal y como  se describe  a continuación.

Identificación morfológica de trips

La identificación morfológica de trips se realizó en el Laboratorio de Protección Vegetal (LPV) del Centro de Investigación Agropecuaria Central (CIAC) del Instituto de Investigación Agropecuaria de Panamá (IDIAP), ubicado en el corregimiento de Los Canelos, distrito  de Santa María, provincia  de Herrera, Panamá.

Los insectos  fueron observados  en un estereomicroscopio Motic® SMZ-168,  con aumento de 40X y un duplicador de 2X, con la finalidad de separar preliminarmente  Thrips  spp. de Frankliniella  spp. Seguidamente, para determinar la especie se realizó  el montaje en láminas fijas siguiendo la metodología propuesta por Mound y Kibby (1998), la cual consiste en colocar inicialmente los especímenes en una solución de NaOH al 10% durante 60 minutos y, posteriormente, tratar los insectos con un gradiente de alcoholes de 70 a 100%. A continuación,  en una gota del medio de montaje (Euparal  o bálsamo del Canadá)  y con ayuda de un microalfiler, se extendieron las alas y se enderezaron las antenas, dejando  visible el pronoto. Inmediatamente,  las láminas se colocaron en un horno a  una temperatura aproximada entre 35 y 40°C durante seis horas. Las observaciones  se realizaron  con ayuda de un estereomicroscopio Motic® SMZ-168, con aumento de 40 a 200X; luego de seis semanas, los preparados se sellaron  de manera permanente con esmalte para uñas.

Para la identificación de la especie de Thrips y Frankliniella se utilizaron las claves taxonómicas  de Palmer et al. (1989), Mound y Marullo (1996) y Moritz et al. (2004), mientras  que para T. palmi se  utilizó además  el protocolo de diagnóstico  para las  plagas reglamentadas, Anexo 01 de la NIMF 27 (IPPC 2007).

Una vez identificados los insectos, se fotografiaron cada uno de los caracteres morfológicos al microscopio Motic®  BA300, con ayuda de una  cámara digital Moticam 2300 y el software Motic Images Plus v2.0.

Identificación molecular de T. palmi

Los especímenes de Thrips spp. procedentes de todos los cultivos de cucurbitáceas y de la mayoría de  las  localidades  geográficas  donde  este  género fue encontrado,  y  que no fueron utilizados en la identificación morfológica debido a que estaban incompletos,  probablemente debido a la manipulación de  los  mismos durante la  colecta, se  utilizaron en  la  identificación  molecular  de  T. palmi  como una  alternativa  de  diagnóstico  a  la  identificación morfológica, tal y como se describe  a continuación.

Extracción de ADN

El ADN de Thrips spp. se obtuvo a partir de especímenes colocados  de manera individual en  tubos de 1,5 ml. Estos insectos fueron macerados con ayuda de un micropistilo,  usando el Wizard® Genomic DNA Purification kit (Promega, Madison, WI, USA). Adicionalmente, se procedió a extraer el ADN de especímenes de Frankliniella spp. (control negativo) provenientes de este estudio, siguiendo el mismo procedimiento descrito previamente para Thrips spp. Los extractos se almacenaron a -30°C para su posterior análisis por PCR.

Amplificación por PCR

La identificación molecular de T. palmi se realizó mediante PCR (Cuadro 1), utilizando una pareja de cebadores  específicos de  esta  especie,  R4  (5`-CCC TCT TAA TTA TGG GTT TAT A-3`) y F5 (5´-CAC AAA TAA TCT TAG TTT TTC TCT T´-3), los cuales amplifican un fragmento de 220-pb, correspondiente al gen mitocondrial de la citocromo oxidasa subunidad I (COI) (Kox et al. 2005).

Las concentraciones finales de cada reactivo fueron las siguientes: 1x tampón PCR, 1,5 mM MgCl⁺², 0,2 mM dNTPs (Promega), 0,76 µM de cada cebador, una unidad de Taq DNA Polimerasa (Invitrogen, Brasil), 1 µl de cada extracto de ADN, y agua ultrapura estéril hasta alcanzar un volumen de 50 µl (Kox et al. 2005). Posteriormente, el ADN de T. palmi se amplificó con ayuda de un termociclador Q-cycler (Quanta Biotech), el cual se programó para llevar a cabo  un ciclo inicial de desnaturalización  a 94°C durante un minuto, seguido por 40 ciclos de desnaturalización  a  94°C durante quince  segundos, hibridación  a 55ºC durante 30 segundos, y extensión a 72°C durante 45 segundos.

Adicionalmente, se llevó a cabo un ciclo de extensión final a 72°C durante diez minutos, este último con la finalidad de sintetizar todos los fragmentos que posiblemente quedaron incompletos,  seguido de un paso de enfriamiento  a 10°C hasta que las muestras fueron recuperadas. Como controles negativos, se  utilizaron extractos de ADN de Frankliniella spp., así como agua ultrapura estéril, los cuales se analizaron bajo las mismas condiciones descritas anteriormente para T. palmi.

Los productos amplificados por PCR (8 µl), se sometieron  a electroforesis  en un gel de agarosa al 1,5% en tampón TBE 1x (89 mM Tris, 89 mM ácido bórico, 2 mM EDTA, pH 8,3), a 56 voltios durante aproximadamente tres horas. A continuación, los productos se tiñeron con bromuro de etidio (0,2 µg/ml), y se visualizaron y fotografiaron bajo luz ultravioleta. El tamaño de los fragmentos amplificados se determinó por comparación con un marcador  de peso molecular de 100 pb DNA Molecular Weight Ladders (Amresco, Solon, OH, USA).

Secuenciación y análisis

Para confirmar la identidad de T. palmi, un producto de PCR fue  purificado con  ayuda  del  High Pure PCR Product Purificación Kit (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania). Posteriormente, este producto fue cuantificado por fluorometría con ayuda del Quant-IT™ dsDNA BR Assay Kits, en un fluorómetro Qubit™ (Invitrogen, Eugene, OR, USA), en el Instituto de Investigaciones Científicas y Servicios de Alta Tecnología  (INDICASAT),  Panamá. Seguidamente, el producto fue secuenciado en ambas direcciones con ayuda del BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit v3.0, en un analizador genético ABI Prism 3130XL (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA), en el Instituto  Smithsonian de Investigaciones Tropicales (Smithsonian Tropical Research Institute, STRI), Panamá.

La secuencia de nucleótidos obtenida fue comparada con ayuda del Instrumento de Búsqueda de Alineamientos Locales Básicos (Basic Local Alignment Search Tool, BLAST) (Altschul et al.  1997), con secuencias de T. palmi disponibles en la base de datos del Centro Nacional para la Información Biotecnológica (National Center for Biotechnology Information, NCBI).

Resultados y Discusión

Descripción de caracteres morfológicos de T. palmi

La identificación y diferenciación de T. palmi de otras especies conocidas del género Thrips, se llevó a cabo según los caracteres morfológicos  observados en este estudio, los cuales indicamos  a continuación.  Uno de los caracteres típicos  de este género es la presencia de dos pares de setas ocelares. En el caso de T. palmi, esta especie presentó setas ocelares gruesas y negruzcas (Figura 2A), ubicadas fuera del triángulo ocelar y la línea exterior  tangente, mientras que su cuerpo era amarillo claro sin manchas de color grisáceo o pardo. Adicionalmente,  mostró antenas de siete segmentos. El tercer y cuarto poseían un cono sensorial bifurcado, el VI medía 42-48 µm de longitud, y los segmentos antenales IV-VII  eran de color oscuro (Figura 2B). En el caso del género Thrips, el número de segmentos antenales  es de 7-8. Por otro lado, el pronoto  de esta especie presentó dos pares de setas posteroangulares (Figura 2C). El ala anterior, presentó una primera vena con una hilera de setas, con espacios en la mitad distal (Figura 2D). El metanoto de este insecto, mostró una estría mesal y, por lo general, convergente, con un par de poros metanotal (sencilas campaniformes)  (Figura 2E). Por otro lado, el tergito abdominal II con cuatro setas laterales (Figura  2F). En relación  a los especímenes machos, los esternitos III-VII tuvieron un área glandular  transversal (Figura 2G). En cuanto  a  los pleurotergitos, estos se observaron sin setas  (Figura 2H), mientras que el tergito adbominal VIII, presentó ctenidio abdominal  posterior al espiráculo,  y peine completo (Figura 2I).

Identificación molecular y análisis de secuencias de T. palmi

La identificación molecular de T. palmi, se realizó mediante PCR, obteniéndose el amplicón (producto de PCR) del tamaño  esperado  (220-pb), a  partir de todos los especímenes ubicados  preliminarmente dentro del género  Thrips  spp., mientras  que dicho amplicón no fue observado en los controles negativos (Frankliniella spp. y agua ultrapura  estéril) (Figura 3).  Estos  resultados  fueron  confirmados  mediante secuenciación de ADN.

La secuencia de T. palmi obtenida en este estudio (TTTTTTCTCTCCATTTAGC TGGGGTATCCTCAATTTTAGGAGCATTAAATTTCATCACTACAATTTTAAATT TAAAAAATAAAAATCTTTCAAGAGAAA
CTAAG), se  comparó con secuencias  de este insecto procedentes de diferentes partes del mundo, publicadas en la base de datos del NCBI y en Glover et al. (2010): número de accesión de GenBank FM956397 (Tailandia), AM932004  (República Dominicana), FM956392 (India) y AM932037 (Japón). En este sentido, la secuencia de T. palmi de Panamá presentó 100% de identidad en una porción del gen (mtCOI), en comparación con las secuencias de esta especie indicadas previamente, confirmando la identidad del insecto.

La secuencia de T. palmi de Panamá no fue publicada en la base de datos del NCBI, debido  a que una de las políticas de dicho centro consiste en no publicar secuencias <200-pb. Por el contrario, las de T. palmi indicadas anteriormente,  presentaron 458-pb;  por lo tanto, estas fueron publicadas en la base de datos del NCBI. Es importante  indicar  que las secuencias publicadas por Glover et al. (2010), fueron obtenidas con cebadores que amplifican una porción más grande  del gen mtCOI. Por lo tanto, dichas secuencias tienen un mayor número de bases en comparación con la de T. palmi de Panamá.
Distribución geográfica de T. palmi en Panamá

Doscientos ochenta y siete especímenes (28,05%; n=1023) fueron identificados como T. palmi mediante morfología  (131 especímenes) y PCR (156 especímenes), y los mismos procedían de diferentes localidades de las provincias  de Los Santos, Herrera, Veraguas y Chiriquí (Cuadro 1). En este sentido, T. palmi había sido reportado  previamente  en una localidad de la provincia  de Herrera (MIDA 2006). Por lo tanto, este es el primer reporte de la presencia de esta plaga en las provincias de Los Santos, Veraguas, y Chiriquí,  según la literatura  consultada. Este insecto no fue encontrado en la provincia  de Coclé, debido probablemente al reducido número de especímenes analizados  en esta región (Cuadro 1).

Recientemente, Goldarazena et al. (2012) reportaron también la presencia de T. palmi en Panamá. No obstante,  estos autores  no indican las localidades y provincias donde identificaron esta plaga. Por lo tanto, nuestro estudio es el primero que describe en detalle la distribución geográfica de T. palmi en Panamá, según la literatura consultada, y ayudará sin duda alguna a la toma de decisiones para tratar de controlar  las poblaciones de esta plaga en las localidades  donde ha sido reportada. Adicionalmente, permitirá implementar medidas cuarentenarias internas para reducir el riesgo de introducción de este insecto en áreas donde todavía no se ha reportado  su presencia. Thrips palmi se encontró desde los 2 hasta los 916 msnm (Cuadro 1). Adicionalmente, el 17,88% (n=520) de los especímenes colectados en cultivos de melón fueron identificados como T. palmi, 27,97% (n=404) en sandía, 80,49% (n=41) en zapallo, y 92,31% (n=52) en pepino. T. palmi fue encontrado  en un cultivo de sandía ubicado  en las inmediaciones  de una planta empacadora de cucurbitáceas en la localidad de La Concepción, en la provincia de Herrera. Por lo tanto, esta situación podría poner en riesgo las exportaciones  de cucurbitáceas de Panamá. Este insecto no se encontró  en el cultivo de chayote (Cuadro 1). Goldarazena et al. (2012) identificaron T. palmi en cucurbitáceas y en malezas asociadas (Amaranthus spp.) y en maíz (Zea mays L.) de Panamá, pero estos autores no indican  las especies de cucurbitáceas donde encontraron este insecto.

Se  identificaron  como  Frankliniella  spp. 736 especímenes (71,95%;  n=1023) (Cuadro 1). No se realizó la identificación, a nivel de especie, debido a que este no era el objetivo del trabajo.

Agradecimientos

Agradecemos al Ing. M.Sc. Vidal Aguilera (LPVCIAC-IDIAP,  Panamá),  Dr.  Abby  Guerra (Grupo CALESA, Panamá) y al Ing. Amed Arcia (Dirección Nacional de Sanidad Vegetal-DNSV-MIDA, Panamá), por  el  apoyo  inicial  en  la  identificación  molecular de T. palmi, a Armando  Gutiérrez  por su apoyo en el montaje y las fotografías de los caracteres morfológicos de los insectos,  y  al  Ing. M.Sc.  Lweonel Agudo (Laboratorio de Suelo-CIAC-IDIAP,  Panamá) por su apoyo en el mapeo de los datos de latitud y longitud  correspondientes  a  las localidades  georeferenciadas. Igualmente,  agradecemos a la DNSV-MIDA, Panamá, en especial al Ing. M.Sc.  Efraín de Gracia (q.e.p.d), Ing. M.Sc. Randy Atencio, Ing. Arquímedes Calderón y  Agr.  Jorge Ramos, por su colaboración  en las colectas de trips en los cultivos de cucurbitáceas  en Panamá.  Agradecemos también a  los Drs.  Joseph Funderburk (Universidad de Florida, USA),  Arturo Goldarazena  (Instituto Neiker, España)  y  Moraima Suris (Centro Nacional de Sanidad  Agropecuaria- CENSA, Cuba), por enriquecer nuestros conocimientos en relación a la identificación morfológica de T. palmi, así  como a  la Dra.  Carmenza  Spadafora  (Instituto de  Investigaciones  Científicas  y  Servicios  de  Alta Tecnología-INDICASAT,  Panamá), por su apoyo en la purificación y cuantificación de los productos de PCR de T.  palmi. De igual forma, agradecemos  a la Ing. MSc. Cecil Montemayor (LPV-CIAC-IDIAP, Panamá)  por la  revisión y  corrección inicial  del Abstract presentado en este artículo. Este trabajo  se realizó como parte del Proyecto I+D  FID-07-070- 2007, financiado por la Secretaría Nacional de Ciencia, Tecnología e Innovación  (SENACYT) de Panamá.

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Literatura citada

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*Correspondencia a:
José Ángel Herrera-Vásquez. Laboratorio de Protección Vegetal (LPV), Centro de Investigación Agropecuaria Central (CIAC), Instituto de Investigación Agropecuaria de Panamá (IDIAP). Carretera Panamericana, Los Canelos-Santa María, Herrera, Panamá. Código postal 0601, Chitré, Herrera, Panamá. joshervs11@gmail.com (Autor para correspondencia).
Anovel Amet Barba-Alvarado. Laboratorio de Protección Vegetal (LPV), Centro de Investigación Agropecuaria Central (CIAC), Instituto de Investigación Agropecuaria de Panamá (IDIAP). Carretera Panamericana, Los Canelos-Santa María, Herrera, Panamá. Código postal 0601, Chitré, Herrera, Panamá. anovelbarba@gmail.com.
1. Este trabajo se realizó como parte del proyecto “Determinación de las características básicas de la población de Thrips palmi (Thysanoptera:Thripidae) en cucurbitáceas cultivadas, con la finalidad de establecer estrategias de manejo integrado”.
2. Laboratorio de Protección Vegetal (LPV), Centro de Investigación Agropecuaria Central (CIAC), Instituto de Investigación Agropecuaria de Panamá (IDIAP). Carretera Panamericana, Los Canelos-Santa María, Herrera, Panamá. Código postal 0601, Chitré, Herrera, Panamá. joshervs11@gmail.com (Autor para correspondencia), anovelbarba@gmail.com

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