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Justificación y objetivos: Los primeros casos de intoxicación por floraciones algales nocivas (FAN) se reportaron en el país en 1990. Sin embargo desde finales de 1999 se ha observado un aumento drástico en el número de personas intoxicadas, especialmente en la costa pacífica del país. En Costa Rica existe gran desconocimiento acerca del problema. Debido al impacto que producen los fenómenos FAN en la salud pública, el turismo local y el ecosistema, es necesario describir las especies tóxicas y sus toxinas para tomar las medidas adecuadas de control y prevención.
Métodos: Se realizaron muestreos de agua en varios sectores de la costa pacífica de nuestro país, con el objetivo de detectar las especies de microalgas potencialmente tóxicas y nocivas, y se interrogó a los pescadores locales. La identificación de las especies se realizó morfológicamente mediante microscopía de luz y electrónica de rastreo. Los hallazgos se compararon con la bibliografía y se propuso el potencial tóxico de estas microalgas, así como los métodos de análisis toxicológico, y la sintomatología de los afectados. Resultados: Observamos en Costa Rica un aumento en número de especies de microalgas productoras de FAN. Se reportaron las especies tóxicas productoras de FAN descritas por varios autores y las encontradas en este estudio. En algunas muestras de floraciones algales hemos encontrado bacterias grandes intracelulares, de forma bacilar, principalmente dentro del dinoflagelado Prorocentrum micans. Esta relación podría estar asociada a la toxigenicidad del alga. Hemos descrito la presencia de 26 dinoflagelados, 8 diatomeas y 1 cianobacteria tóxica en las FAN de las costas del Océano Pacífico costarricense.
Descriptores: mareas rojas, floraciones algales nocivas, dinoflagelados, toxicología. Recibido: 10 de abril de 2003
Abreviaturas: AO, ácido okadaico; BR, bioensayo en ratón; FAN, floraciones algales nocivas; CLAP, cromatografía líquida de alta presión; IAM, intoxicación amnésica por marisos; IDM, intoxicación diarréica por mariscos; IPM, intoxicación paralizante por mariscos; MAG-S, ministerio de agricultura y ganadería laboratorio de sanidad; MEB, microscopio electrónico de barrido; UR, unidades ratón; VCP, veneno ciguatérico de pescado.
Debido al gran impacto ambiental, económico, social y de la salud pública es necesario contribuir en alguna medida con un programa de monitoreo de mareas rojas, para definir los agentes causales y los factores que las producen, como son: la cantidad de luz, salinidad, turbulencia, temperatura y macronutrientes 4 . Cuando se conozca las especies tóxicas en Costa Rica y la bioquímica y fisiopatología de las toxinas, se podrá realizar un diagnóstico preciso y rápido para ofrecer un mejor tratamiento en los casos que lo ameriten. El objetivo de este trabajo es describir las principales especies de organismos que forman parte del fitoplancton marino y son productoras de mareas rojas en Costa Rica, así como describir sus toxinas, la fisiopatología, clínica y tratamiento, con el fin de aumentar la información del personal responsable de ofrecer los servicios de salud en las zonas afectadas.
Materiales y métodos Desde 1997, el Centro de Investigación en Estructuras Microscópicas colectó muestras de agua, tanto en superficie como a 5 metros de profundidad, en diversos sectores de la costa pacífica. Las colectas se realizaron en un promedio cada 22 días, en la parte interna del Golfo de Nicoya, Puntarenas, estero de Puntarenas, Paquera, Puerto Caldera y Quepos. Se anotaron las observaciones de los pescadores y sus familiares acerca de los padecimientos asociados con las FAN. La muestras se colectaron con botella Niskin de 1 litro de capacidad, con el propósito de realizar conteos celulares y mediante una colecta en la superficie con una red para fitoplancton de 20 µm de grosor de poro. Las muestras se fijaron en solución de Karnovsky amortiguada en cacodilato de sodio al 0.1M, pH 7.4 5 . El procesamiento se realizó para microscopía electrónica de barrido (MEB) y para microscopía de luz. Para MEB, las muestras fueron posfijadas con tetraóxido de osmio al 1%, durante 1 h. Se deshidrataron mediante un gradiente ascendente de alcohol etílico y se infiltraron en acetato de amilo para su posterior secado en punto crítico. Luego se montaron sobre bases de aluminio y se recubrieron con una capa de platino de 30nm de grosor, en un cobertor iónico marca Hitachi, modelo IB-5. La muestras se observaron con un microscopio electrónico de barrido Hitachi S-2360N, a un voltaje de aceleración de 15KV. Las microalgas encontradas fueron fotografiadas y caracterizadas morfológicamente, para identificarlas taxonomicamente. Con el microscopio óptico se observaron las microalgas vivas y se determinó el lugar de algunas organelas importantes para su clasificación. Se prepararon láminas fijas en resina para ser fotografiadas y en algunos casos se agregó hipoclorito de sodio, con el fin de despegar las placas de dinoflagelados armados para identificar al microorganismo. Los dinoflagelados se mantuvieron en cultivos unialgales para enviar muestras a laboratorios especializados y determinar la presencia de toxinas ellas. Con el propósito de identificar y reportar las especies, las micrografías electrónicas se compararon con la información existente en bases de datos internacionales y con la ayuda de expertos extranjeros. Resultados y discusión
En el Cuadro No. 1 se presentan las microalgas y ciliados marinos potencialmente dañinos de la costa Pacífica de Costa Rica. En el primer informe de FAN en Costa Rica, en 1981, se identificó al dinoflagelado Gymnodinium catenatum 6 , luego, en 1985, se describió una FAN ocasionada por Gonyaulax digitale 7 . En 1990 se reportó el primer caso conocido en Costa Rica de (IPM) por consumo de Mariscos, que afectó a un grupo de personas en la costa Pacífica, siendo el dinoflagelado tóxico productor de la floración P. bahamense var. compressum y el principal vector el molusco ostión vaca (Spondylus calcifer) 8 . Estas floraciones de microorganismos, además de reducir el oxígeno disuelto en el agua, tienen un gran impacto ecológico en muchas regiones del mundo y causan mortalidad de otros organismos acuáticos, incluyendo corales y peces 9 ,10 . Se ha encontrado una alta mortalidad de corales en las costas pacíficas de Costa Rica, producida especialmente por una floración dominada por los dinoflagelados Cochlodinium catenatum y Gonyaulax monilata (ahora Alexandrium monilatum) 11 . En 1995 se identificó a los dinoflagelados Prorocentrum balticum, Gymnodinium catenatum y Alexandrium monilatu m, como productores de floraciones algales en la costa Pacífica de nuestro país 13 . A finales de 1999 se detectó una FAN frente a las costas de Puntarenas, Pacífico Central, que perduró hasta marzo de 2002, desapareciendo y reapareciendo intermitentemente durante ese periodo, y cuya extensión abarcó desde la parte norte en Guanacaste, hasta el sur de la costa Pacífica en Quepos, incluyendo el Golfo Dulce 13 . En esta oportu-nidad los dinoflagelados que se encontraron en la floración fueron Pyrodinium bahamense v a r. bahamense y var. compressum, además de Gymnodinium catenatum. (Figuras. 1B y C ). En 2001 se reportó una floración algal de Lingulodinium polyedrum en Bahía Culebra, Pacífico Norte 14 . Aeste dinoflagelado se le ha relacionado con la producción de yesotoxinas. En 2002 15 se informó el primer caso de FAN dominadas por diatomeas en Costa Rica, especificamente la diatomea que dominaba la floración fue Pseudo-Nitzschia pungens ( Figuras. 1D y E ), la cual ha sido relacionada con producción de ácido domóico, y en menores concentraciones se encontraban las diatomeas Skeletonema costatum, Chaetoceros lorenzianus, las cuales han estado vinculadas con el daño a las branquias de los peces, por sus resaltadas estructuras silíceas (Figuras 1F y 2A y B ).En mayo de 2002, se reportaron 17 casos de intoxicación, principalmente en niños de la localidad de Caldera 16 . Los afectados manifestaron dolor abdominal, trastornos respiratorios y ardor en los ojos; además, aparecieron cientos de peces muertos en la playa. Las microalgas que dominaban la floración fueron el dinoflagelado Cochlodinium cf. polykrykoides y la cianobacteria Trichodesmiun erythraeum (Figuras. 2D y E ), la cual ha sido asociada con el síndrome conocido como "febre de Tamandaré" o "tingui", denominado así por el nombre de una localidad en la costa noreste de Brasil. Este provoca dermatitis por contacto de tipo químico y es la causa de grandes molestias en las poblaciones donde se han encontrado FAN 2 . Según algunos pescadores entrevistados en la zona de Punta Cuchilla (Paquera) y Puntarenas, al momento de lavar sus redes de pesca y tener contacto con el agua de mar contaminada con la marea roja, presentaron dermatitis generalizada en algunos casos. Los pescadores entrevistados que sufrieron una intoxicación paralizante, recuerdan haberse sentido mal a los 30 min de haber ingerido los ostiones contaminados, refiriendo parestesias en la lengua, cefalea, naúseas, disartria y disnea. Uno de los intoxicados refiere haber estado hospitalizado durante tres meses debido a una parálisis generalizada. Recientemente se encontró altas concentraciones del dinoflagelado tóxico Prorocentrum minimum (Figura 2C ) frente a la costa de Puntarenas, especie que en el pasado no había sido observada.
Intoxicaciones producidas por FAN Intoxicación Paralizante por Moluscos (IPM): Este tipo de intoxicación constituye la principal amenaza para la salud pública en América Latina 1 , 2 . Las toxinas que conforman la IPM están formadas por un núcleo tetrahidropurínico, siendo todas ellas análogas a la saxitoxina. Actualmente existen más de 26 derivados de la saxitoxina 17 , 18 . Desde el punto de vista técnico, la cuantificación de las toxinas de este grupo es muy difícil, debido a su complejidad y gran número de derivados químicos. Este grupo de toxinas se distribuye en el Pacífico Sudamericano y en el Atlántico 2 , 19 y es el tipo de intoxicación que se ha presentado en la costa Pacífica costarricense desde hace más de 20 años 3 , 16 , 8 . Las personas que ingieren moluscos bivalvos contaminados con toxinas de marea roja, presentan cuadros neurotóxicos en los primeros 15 min. de haber ingerido la toxina, pues esta se absorbe en la mucosa bucal y gástrica. El grado de intoxicación varía dependiendo de la cantidad de toxina ingerida. Las primeras manifestaciones son: parestesia bucal o sensación de hormigueo alrededor de la boca, que se trasmite luego a manos y pies. Luego aparecen la cefalea y náuseas, seguida por incoordinación al hablar, alteración del pulso y dificultad respiratoria. En casos graves ocurre una parálisis muscular flácida, insuficiencia respiratoria y posterior paro cardiorrespiratorio 2 ,17 ,18 . Las toxinas paralizantes alteran el transporte del ion sodio y son capaces de unirse con alta afinidad a su receptor en la membrana, que es el canal de sodio presente en células de mamíferos, aves, peces y anfibios, y también en invertebrados como los moluscos bivalvos 19 , 20 . Estas toxinas se dividen en las bloqueadoras del canal de sodio, entre las que se encuentran las saxitoxinas, tetrodotoxina y toxinas de caracoles marinos; y en las activadoras del canal de sodio, siendo estas las ciguatoxinas, brevetoxinas A y B 19 . El número de moléculas de toxina capaces de unirse al canal de sodio es muy alto bloqueo del paso de iones sodio hacia el interior de la célula, lo que causa parálisis neuromuscular 21 y paro respiratorio en mamíferos 2 . Debido a las características estructurales de estas toxinas, presentan diferencias en la potencia tóxica, la cual, por conveniencia, se expresa en Unidades Ratón (UR) por mmol de toxina. Así se puede calcular la toxicidad de las muestras de moluscos sospechosos y expresarla en unidades equivalentes (Unión Europea Norma ISO/CEI 17025 en 1999, ley 91/492/EEC de la Comunidad Económica Europea).
Intoxicación Diarréica por Moluscos (IDM): Las toxinas del tipo diarréico son moléculas polietéreas lipofílicas 22 , como el ácido okadaico (AO), pectenotoxinas, yesotoxinas dinofisitoxina 1 (DTX1), dinofisistoxina 2 (DTX2) y las dinofisistoxina 3 (DTX3) 2 , 23 y sus derivados dinophysistoxina 1 y 2 (DTX-1, DTX-2) y otros compuestos como odularinas y caniculina A 19 .Tienen alto peso molecular y son liposolubles 24 . El mecanismo de acción es mediante la inhibición de las fosfatasas, o sea, de las enzimas que disminuyen el grado de fosforilación de proteínas que controlan la permeabilidad del epitelio intestinal. Los pacientes afectados por estas toxinas presentan náuseas, vómito, dolor abdominal y una diarrea secretoria que los lleva a la deshidratación. Este tipo de intoxicación diarréica que se produce por el consumo de mariscos contaminados, es similar al ocasionado por el cólera, por lo que, para realizar el diagnóstico diferencial, se debe investigar el tipo de alimentos ingeridos recientemente y efectuar un análisis de toxina a los moluscos, con el fin de confirmar la presencia del ácido okadaico. El tratamiento consiste en corregir el desequilibrio hidroelectrolítico. Los síntomas pueden durar 4 días, por lo que se debe evitar la muerte por deshidratación.
Ciguatera o veneno ciguatérico de pescado (VCP): La ciguatera es un síndrome causado por el consumo de peces tropicales y subtropicales contaminados principalmente con ciguatoxinas. Produce desórdenes gastrointestinales, cardiovasculares y, a las pocas horas, el desarrollo de síntomas neurológicos, entre los que se encuentra la reversión de sensación de temperatura. La desintoxicación es lenta, ya que se han reportado casos en los cuales los síntomas perduran durante toda la vida del paciente. Ha producido muertes humanas en el Océano Índico, sin embargo, son raros los informes de muertes en el Océano Pacífico y el Caribe 17 . Las ciguatoxinas son un grupo de poliéteres de bajo peso molecular, liposolubles, estables al calor y activadores del canal de sodio 17 . El bioensayo en ratón es el método de detección más utilizado para las ciguatoxinas en peces y ensayos in vivo utilizando camarones, larvas de dípteros, gatos, pollos y mosquitos, ya que el bioensayo en ratón no estandariza todos los diferentes tipos de ciguatoxinas. Estos procedimientos requieren de un tiempo de observación largo en los ratones, además, para la confirmación de las toxinas se precisan de métodos analíticos, comoespectroscopia de masas o cromatografía líquida de alta resolución (CLAP) 2 ,17 .
Toxinas de acción rápida: Las toxinas de acción rápida son un nuevo grupo de toxinas que inducen síntomas neurotóxicos y la muerte rápida por un mecanismo de acción aún desconocido 27 . Entre este grupo de toxinas están los espirolidos del A al D, las pinnatoxinas y las gymnodininas 17 . Los espirolidos son toxinas emergentes en el plancton y moluscos, compuestos macrocíclicos biológicamente activos, consistiendo en un sistema tricíclico espiroligado de un anillo éter 28 , que procede de los dinoflagelados marinos Alexandrium ostenfeldii, A. tamarense, Fragilidium subglobosum, Gonyaulax spinifera, Gonyaulax grindleyi (antes Protoceratium reticulatu m), y Scrippsiella trochoidea, especies que se encuentran en el Pacífico de Costa Rica 29 . Los azaspirácidos pertenecen a este nuevo grupo de ficotoxinas encontradas como responsables de una intoxicación similar a la intoxicación IDM, asociada al consumo del moluscos bivalvos en cultivo, como Mytilus edulis y Crassostrea gigas, en Europa e Irlanda 17 , 30 , 31 . Se ha detectado el Protoperidinium crassipe s, como el dinoflagelado fuente de azaspirados 17 29 , 32 . Los azaspirácidos son persistentes en mariscos y se han encontrado en mejillones hasta 8 meses después de la intoxicación inicial 30 . Los síntomas son similares a los de la IDM, sin embargo, constituyen un nuevo síndrome que ha sido llamado intoxicación por azaspirácidos (IA).
No se conoce con exactitud por qué los dinoflagelados producen toxinas que afectan al hombre. Se cree que existen varios factores ligados a estos, como son la producción de metabolitos secundarios, la simbiosis con bacterias, la ventaja selectiva que tienen estas especies, las reservas de nitrógeno, la producción de bioluminiscencia, expresión de mecanismos de defensa, o bien, como competencia con otras especies fitoplanctónicas 1 . En muestras de floraciones algales en Costa Rica, hemos encontrado bacterias grandes intracelulares, de forma bacilar, principalmente dentro del dinoflagelado Prorocentrum micans. Esta relación podría asociarse a la toxigenicidad del alga 29 . En otros estudios 33 , 34 se han observado bacterias productoras de toxinas asociadas simbióticamente con dinoflagelados y se menciona que su toxigenicidad puede influenciar los focos de toxicidad algal por los niveles de asociación entre la bacteria y el alga. Recientes estudios han demostrado que las bacterias desempeñan una función muy importante en el control de las floraciones algales, regulando el impacto y la toxicidad producida por estas 35 . Actualmente ocurren cambios climáticos globales, algunos de ellos por la actividad humana. Por ejemplo, el aumento de la radiación ultravioleta modifica la composición de las comunidades de fitoplancton en los sistemas costeros y aumenta las FAN. Los grandes navíos del transporte marítimo internacional utilizan agua como lastre para estabilización; la succionan en grandes cantidades en diversas regiones y luego la descargan en nuestras costas. De esta manera diseminan las células vegetativas y las esporas de especies tóxicas pasan a formar parte de los sedimentos marinos en un nuevo hábitat, constituyen parte de la flora tóxica endémica en la zona 1 .
Agradecimientos Los autores agradecen la colaboración de la Vicerrectoría de Investigación de la Universidad de Costa Rica; a la Dra. Beatriz Reguera, del Instituto Español de Oceanografía por sus comentarios y su colaboración con la identificación taxonómica de algunas especies como Cochlodinium cf. polykrikoides y Prorocentrum minimun; al personal del CIEMic, y a los pescadores de Puntarenas por sus valiosas observaciones y asistencia en la colecta las muestras. También se gradece el apoyo económico del CONICIT-MICIT, para la presentación de estos datos en congresos internacionales.
Abstract Justification and Objectives: The first cases of intoxication due to Harmful Algae Blooms (HAB) in Costa Rica were reported in 1990. However, towards the end of 1999 a drastic increase of poisoned people was observed, especially along our pacific coast. There is lack of information regarding the problems of HAB. Due to the impact of HAB on public health, local tourism and the ecosystem, it is necessary to describe toxic species and their toxins in order to apply adequate control and preventive measures. Methods: Water samples were taken in various locations along the costarican pacific coast with the aim of detecting potentially toxic and harmful species of microalgae. Species identification was carried out morphologically by means of light and scanning electron microscopy. These findings were compared with current literature and the potential toxin of these microalgae was proposed as well as the methods of toxico-logical analysis and the clinical findings of those affected. Results: Recently, an increase in the number of HAB producing microalgae species has been observed in Costa Rica. This study reports these findings together with ones from those of other authors related to HAB producing species in Costa Rica. In few algal bloom samples, large intracellular bacillary bacteria were found, mainly within the dinoflagellate Prorocentrum micans. This relation may be associated with the toxicity of the algae. Discussion: It is believed that the increase in coastal zone pollution and the transportation of species by means of ships ballast water may be the cause of the appearance of these microalgaes. The presence of 26 dinoflagellates, 8 diatoms and 1 cyanobacteria, all potentially harmful in HAB events, was currently demonstrated along the pacific coast of Costa Rica. These microalgae are capable of producing toxins which may cause: paralysis, amnesia, diarrheia, and neurotoxicity poisonings, ciguatera and Tamandré fever. It is important that health personnel be knowledgeable regarding HAB events and to implement an effective monitoring and program control in Costa Rica in order to protect the population.
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1 Centro de Investigación en Estructuras Microscópicas, CIEMic, Universidad de Costa Rica. Correspondencia: CIEMic, Ciudad de la Investigación, Universidad de Costa Rica, CP2060, Costa Rica. Fax: 207 3182. E-mail: efreer@cariari.ucr.ac.cr |
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