Resumo

FERNANDEZ-RODRIGUEZ, Raquel; GARRO-MONGE, Giovanni; GUERRERO-BARRANTES, Maritza  e  GOMEZ-ESPINOZA, Olman. El promotor de la alfa-tubulina de Chlorella vulgaris permite la transformación genética de la microalga verde tipo cocoide. Tecnología en Marcha [online]. 2020, vol.33, n.2, pp.27-36. ISSN 0379-3982.  http://dx.doi.org/10.18845/tm.v33i1.5017.

Las microalgas se han convertido en una plataforma viable para la producción de proteínas recombinantes de alto valor. Aunque se han desarrollado diversos conjuntos de herramientas genéticas para la transformación de microalgas, algunos elementos críticos, como los promotores endógenos, deben mejorarse para aumentar los niveles de expresión génica posterior al proceso de transformación. Para contribuir a ello, el presente estudio tuvo como objetivo evaluar una secuencia de la región 5’ del gen alfa-tubulina de Chlorella vulgaris, como promotor para la expresión de un gen resistencia a antibiótico en Chlorella sorokiniana. Mediante análisis in silico se logró identificar un promotor proximal correspondiente a 281 nucleótidos corriente arriba del codón de inicio ATG, el cual poseía 9 potenciales elementos reguladores en cis, incluyendo Caja TATA y Caja CAAT. La secuencia promotora proximal se usó para dirigir la expresión de un gen de resistencia a la estreptomicina (aada), previa optimización de su uso de codones. La optimización de codones de la secuencia aada permitió obtener un contenido de GC del 69,8% (en comparación con el 53% del gen original), lo que aumenta su similitud con los genomas de Chlorella sp. (67,2%). Ambos elementos genéticos se clonaron en el vector pUC57-Kan y se transformaron en células de C. sorokiniana mediante electroporación. Las colonias de microalgas transgénicas fueron identificadas a través de cultivo en medio selectivo y PCR. Nuestros resultados demostraron la capacidad del promotor alfa-tubulina de Chlorella vulgaris para expresar un gen heterólogo de resistencia a antibiótico en células de C. sorokiniana. La investigación de secuencias promotoras endógenas es esencial para lograr una expresión génica heteróloga eficiente, especialmente en microalgas utilizadas para la producción industrial como las del género Chlorella.

Palavras-chave : Electroporación; kazusa; estreptomicina; transgénico; Caja TATA.

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