DEL VALLE, Christian; RODRIGUEZ, Anayanci    ESPINOZA, Marta. Comparación de tres métodos de extracción de ADN a partir de restos óseos. []. , 52, 3, pp.717-725. ISSN 0034-7744.

^len^aComparison of three methods for DNA extraction from bone remains. Extraction of amplifiable DNAis a frequent problem when working with degraded specimens like bone samples. The possibility of obtaining as much information as possible from these samples has a particular significance in many forensic investigations. The present investigation was aimed to assess the efficiency of three organic extraction methods for purifying amplifiable DNA from bone samples. The amount of nucleic acids obtained, the success rate in the amplification of DNA microsatellite (STR) markers and amelogenin by PCR, the influence of PCR inhibitors and environmental conditions, and where the samples were found before their processing in the laboratory, were all evaluated in this investigation for the three methods. Results showed that method A (a modification of FBI method for DNA extraction) performed better in producing not a higher amount but a better quality amplifiable DNA, in comparison with the other two methods evaluated. It was also demonstrated that the quality of the DNA to be amplified by PCR was influenced by the presence of inhibitors and/or contaminants and the environmental conditions where the bone sample was taken from. The worst conditions were observed from aquatic environments. The results suggest that the implementation of some specific modifications in the method A (use of purification columns, reliable quantification methods and different dilutions) would help to obtain better DNA extracts intended to be used in different molecular identification tests. Rev. Biol. Trop. 52(3): 717-725. Epub 2004 Dic 15.^les^aDiferentes investigaciones han demostrado que la posibilidad de llevar a cabo estudios de marcadores genéticos está muchas veces limitada por la capacidad de obtener ácidos desoxirribonucleicos (ADN) a partir de muestras degradadas como los restos óseos. Asu vez, la información que de allí se derive resulta de suma importancia en diferentes situaciones médico-legales. El presente estudio se diseñó para comparar la eficiencia de tres métodos orgánicos de extracción de ADN amplificable por la técnica de Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) a partir de muestras de hueso. En esta investigación se procedió a evaluar, comparativamente, la cantidad de ácidos nucleicos obtenidos, el éxito en la amplificación de marcadores microsatélites (STR) y amelogenina por PCR, la posible presencia de inhibidores y el contexto de donde provenían las muestras para los tres métodos. Una modificación del método de extracción utilizado por el FBI (Federal Bureau of Investigation) de los Estados Unidos, denominado método A, aunque no produjo la mayor cantidad de ADN, mostró el mejor rendimiento en cuanto a la calidad requerida para la amplificación por PCR. A la vez, se demostró que dicho rendimiento es influenciado por la posible presencia de inhibidores o contaminantes y por el contexto en el cual permanecieron las muestras previo a su análisis en el laboratorio. Los hallazgos sugieren que la introducción de algunas modificaciones específicas al método A (la incorporación de columnas de purificación, la cuantificación específica de ADN humano en los extractos y el uso de diluciones) podría mejorar sustancialmente el rendimiento de este método de extracción para que pueda ser utilizado con mayor éxito en diferentes investigaciones médico-legales que requieran la disponibilidad de ADN en calidad y cantidad adecuadas.

: .