Revista Costarricense de Ciencias Médicas

La Revista Costarricense de Ciencias Médicas

Efecto del dimetilsulfóxido en la respuesta quimioluminiscente y el consumo de oxígeno de neutrófilos humanos activados

El dimetil sulfóxido es un secuestrador inactivante del radical hidroxilo (.OH), e inhibe, de manera proporcional a la dosis, la quimioluminiscencia (QL) de luminol (QLU) y de lucigenina (QLC) en leucocitos polimorfonucleares neutrófilos (PMN) activados con estimulantes solubles y partículas de zimosán opsonizado (ZO). Los resultados indican que la inhibición de la QLU en respuesta al ionóforo de calcio A23187 puede deberse al secuestro de .OH por DMSO, mientras que la inhibición de la QLC sugiere que el DMSO afecta negativamente a la oxidasa de membrana de PMN. Ello se confirmó al observar que el DMSO inhibió el consumo de O2 en PMN activados con FMLP y ZO. Cuando el DMSO se añadió luego de la estimulación con FMLP y ZO, no hubo inhibición de la QLU, pero sí de la inducida por A23187. El lavado de PMN expuestos a DMSO causó un incremento en la QLU en respuesta a la estimulación con FMLP y ZO. Ello es congruente con la hipótesis de que el DMSO interfiere con la activación de las subunidades de membrana de la oxidasa por las unidades reguladoras citoplasmáticas. Estos resultados implican que el DMSO puede inhibir la QL en fagocitos tanto mediante secuestro de .OH como por interferencia con la producción de superóxido por la oxidasa de membrana.

Dimethylsulfoxide (DMSO), a hydroxyl radical scavenger, exerted a dose dependent inhibition on the luminol and lucigenin-enhanced chemiluminiscent responses of human neutrophils activated with soluble and particulate stimulants. DMSO inhibition of the luminol chemiluminescence induced by calcium ionophore A23187 was probably due to .OH scavenging, whereas inhibition of the lucigenin chemiluminiscence suggested DMSO negatively affects the NADPH-dependent membrane oxidase of neutrophils. In agreement with this, DMSO moderately inhibited O2 consumption in PMN suspensions stimulated with chemotactic peptide and opsonized zymosan. DMSO inhibition of chemotactic peptide and opsonized zymosan-induced luminol chemiluminescence was observed only when added before or in conjunction with stimulants, whereas A23187-induced chemiluminescence was inhibited by DMSO regardless of time of addition. Washing of DMSO-treated PMN resulted in increased luminol enhanced chemiluminescence in response to chemotactic peptide and opsonized zymosan. This is consistent with the idea that DMSO may be interfering with activation of the membrane subunits of the oxidase by translocation and docking of the cytoplasmic, regulatory subunits. These data imply that DMSO inhibits neutrophil chemiluminescence both by .OH scavenging and interfering with oxidase activation.

La exposición a ozono disminuye la adherencia y aumenta la permeabilidad de membrana de macrófagos alveolares de rata

El ozono es un gas generado por procesos fotoquímicos en áreas urbanas o industriales con niveles altos de contaminación, y su inhalación causa inflamación en vías respiratorias. Para estudiar el daño causado por el gas, macrófagos alveolares fueron obtenidos por medio de lavado pulmonar de ratas Sprague-Dawley, y expuestos a ozono (0,594 ppm) por un máximo de 60 minutos. Los efectos de la exposición se manifestaron como disminución de la adherencia celular a un sustrato de poliestireno, y un incremento en la permeabilidad de la membrana plasmática, manifiesto como aumento en la liberación específica de 51Cr, y como aumento en el calcio citoplásmico, evidenciado por medición espectrofluorométrica. Los resultados obtenidos apoyan la idea de que la membrana celular es el blanco principal de la acción del ozono. La elevación en el calcio citoplásmico podría mediar otras respuestas de los macrófagos al ozono, incluyendo la producción de eicosanoides y óxido nítrico, que acarrean una reducción concomitante en la capacidad fagocítica y la producción de superóxido.

Ozone gas is generated photochemically in areas with high levels of automotive or industrial emissions, and causes irritation and inflammation of the airways if inhaled. Rat alveolar macrophages were obtained by lung lavage from male Sprague Dawley rats and used as a model to assess ozone induced cell damage (0,594 ppm for up to 60 minutes). Ozone exposure caused loss of cell adherence to a polystyrene substrate and increased membrane permeability, as noted by increases in specific 51Cr release and citoplasmic calcium levels. The results indicate that the cell membrane is a target for ozone damage. Elevations of cytoplasmic calcium could mediate other macrophage responses to ozone, including eicosanoid and nitric oxide production, with concomitant decreases in phagocytic ability and superoxide production.

Determinación de ciclosporina sanguínea realizada en el Hospital San Juan de Dios, San José, Costa Rica

Se determinó los niveles sanguíneos de ciclosporina y metabolitos (método de inmunoensayo de polarización de fluorescencia TDx, Abbott) y ciclosporina (método de inmunoensayo de polarización de fluorescencia AxSyM, Abbott) en 86 pacientes transplantados de riñón del Hospital San Juan de Dios. Los resultados fueron en promedio 3,26 veces mayores con el método de TDx que con el de AxSyM (amplitud=1,02-6,01, S.D.=0,99). Esto se puede atribuir a la reactividad cruzada del antisuero del TDx contra metabolitos de ciclosporina. La amplia variabilidad en las proporciones ciclosporina y metabolitos/ciclosporina (1,02-6,01) podría atribuirse a las diferencias interindividuales en la actividad de enzimas con citocromo P-450. Se sugiere que las diferencias en los métodos para determinar niveles de ciclosporina requerirían un ajuste en los márgenes terapéuticos de la droga.

Cyclosporine and metabolites (maded by FPIA Abbott TDx) and cyclosporine (maded by FPIA Abbott AxSyM) blood levels were assayed on 86 renal transplanted adult patients of any sex. Results were 3.26 times greater with TDx than with AxSyM (range=1,02-6,01, SD=0,99). That may be attributed to TDx antiserum cross-reactivity with cyclosporine metabolites. The wide variability in TDx/AxSyM rates (1,02-6,01) could be caused by interindividual differences on P-450 cytocrom-enzyme activities. It is suggested that differences in methods may require adjustments in therapeutic ranges.

Un método rápido de reprocesamiento para microscopia electrónica de cortes histológicos en parafina

Se describe un método simple y rápido para el re-procesamiento de tejidos incluidos en parafina usados en microscopia de luz para poder ser observados con microscopia electrónica de transmisión (MET) y de rastreo (MER). Los tejidos incluidos en parafina se seccionaron, desparafinaron en tolueno y se expusieron a vapores de osmio mediante irradiación con microondas en un horno de microondas doméstico. Los tejidos fueron embebidos en resina epóxica, polimerizados y seccionados. El método de procesamiento requirió un tiempo relativamente corto (aproximadamente 30 minutos para MET y 15 para MER) y rinde una calidad razonable de la ultraestructura para propósitos diagnósticos.

A simple and rapid method is described for re-processing of light microscopy paraffin sections to observe they under transmission electron microscopy (TEM) and scanning electron microscopy (SEM). The paraffin-embedded tissue is sectioned and deparaffinized in toluene; then exposed to osmium vapor under microwave irradiation using a domestic microwave oven. The tissues were embedded in epoxy resin, polymerized and ultrathin sectioned. The method requires a relatively short time (about 30 minutes for TEM and 15 for SEM), and produces a reasonable quality of the ultrastructure for diagnostic purposes.

Cierre Asistido con Presión Negativa (VAC), en el tratamiento de esternotomía infectada: primer caso en Latinoamérica

Una nueva técnica utilizando el cierre asistido con vacío o presión negativa (VAC, por sus siglas en inglés) se utilizó exitosamente en un paciente masculino de 57 años, con una herida de esternotomía dehiscente e infectada. Posterior a su desbridamiento y drenaje de absceso, el tratamiento regular con gasa iodoformada que utilizó por 10 días, fue sustituido con la aplicación de presión negativa con succión controlada durante 7 días. Esta novedosa técnica, para el cierre de heridas, utilizada por primera vez en Latinoamérica, en este tipo de lesión, hizo posible reducir el tiempo de cicatrización y los costos hospitalarios inherentes a este tipo de complicación infecciosa.

A new technique using vacuum assisted closure (VAC) was succesfully applied to a 57 year old, male patient, with a dehisced infected sternotomy wound. After debridment and abscess drainage, a standard treatment with iodorform gauze strip was applied during 10 days, then it was substituted with by the application of negative pressure by controlled suction through a porous derssing, during 7 days. This novel technique, the first time applied in Latinamerica in this kind of lesion, has made possible to reduce healing time and hospital costs.

Satelismo plaquetario: primeros dos casos reportados en Costa Rica

Menos de 100 casos de Satelitísmo Plaquetario se han descrito desde que en 1963, Field y MacLeod describieron por primera vez este fenómeno. Estos son los dos primeros casos del fenómeno descritos en la literatura Costarricense. El satelitismo plaquetario se observo en muestras sanguíneas con EDTA como anticoagulante y alrededor de los polimorfonucleares. A diferencia de otros casos descritos en la literatura la fagocitosis plaquetaria era evidente y no se observo pseudotrombocitopenia.

Field and MacLeod first reported the platelet satellitosis or satellitism in 1963 and to date is has been observed in no more than 100 cases. These are the first two cases reported in Costa Rica. This phenomenon occurred only in blood anticoagulated by EDTA and around polymorphonuclears. Pseudotrombocytopenia was not observed but platelet phagocytosis was evident.

Brucella: una bacteria virulenta carente de los factores de virulencia clásicos

La brucelosis es una enfermedad muy antigua conocida como fiebre de Malta. Fue descrita inicialmente en forma clínica por Marston en 1859 y Sir David Bruce aisló su agente causal en 1887. La brucelosis es una zoonosis de distribución cosmopolita que ha llegado a ser un serio problema económico y de salud pública en ciertos países. Los miembros del género Brucella son patógenos intracelulares facultativos que infectan una gran variedad de mamíferos. La bacteria se trasmite por ingestión o contacto con materiales contaminados provenientes de animales enfermos. A pesar de que algunos factores de virulencia han sido relacionados con Brucella, todavía no se conocen sus verdaderos factores de virulencia. Brucella no demuestra poseer factores de virulencia agresivos como exotoxinas, cápsula, plásmidos, fimbrias, flagelos o variación antigénica. Sin embargo, es muy virulenta y patogénica en sus huéspedes. Esta paradoja o controversia ha sido discutida por grupos de investigación que no aceptan la ausencia de verdaderos factores de virulencia y otros grupos que piensan que su baja actividad biológica in vitro e in vivo es per se un factor evolutivo de adaptación a la vida intracelular y como tal debe considerarse un factor de virulencia. Esta capacidad de adaptación esta probablemente relacionada con la composición de la membrana externa.

Brucellosis is an ancient disease known as Malta fever. Marston clinically described it for the first time in 1859 and its causative agent was isolated in 1887 by Sir David Bruce. Brucellosis is a zoonosis and is world wide distributed being a serious economic and public health problem in certain countries. Members of the genus Brucella are facultative intracelular pathogens, which infect and produce disease in a wide variety of mammals. Ingestion or contact with contaminated materials can infect humans. Although some factors have been implicated in the virulence of Brucella the exactly virulence mechanisms of this intracellular microorganism are not known yet. Brucella does not show aggressive virulence mechanisms such as exotoxins, anti-phagocitic capsules, plasmids, fimbria, flagella or antigenic variation. Even though it is highly pathogenic for preferred or accidental hosts. This paradigm has been discussed by groups who do not accept the absence of common virulent factors and groups that believe that the low in vitro and in vivo biological activities and silent capacity of Brucella to adapt to the intracellular environment is an evolutive virulence factor by itself. This capacity of intracellular adaptation is probably related to the outer membrane characteristic composition.

Aseguramiento de la calidad analítica y norma ISO 17 025 en laboratorios clínicos y químicos

Actualmente hay un gran interés en la estandarización de los sistemas de aseguramiento de calidad en los laboratorios, puesto que la aceptación y credibilidad de sus resultados depende de la identificación de las fuentes de variabilidad, de su control y de la documentación que así lo demuestre. Lo cual es resultado en buena medida de la globalización del mercado de bienes y servicios. En diciembre de 1999, se publicó la norma internacional ISO 17 025, que establece los requisitos administrativos y técnicos que debe cumplir un laboratorio de pruebas o calibración para obtener reconocimiento internacional, dentro del contexto de la Organización Mundial del Comercio. En este artículo se discuten los contenidos de la norma y su aplicación en laboratorios clínicos y químicos.

There is nowadays a strong concern for standardization of laboratory quality assurance systems, since results acceptability and confidence depend on identification of the sources of variability, their control and documentation, as a result to a greater extent of word commercial globalization. During December 1999, the International Standard ISO 17 025 was published, establishing organizational and technical requirements for test and calibration laboratories, in order to get international recognition, into the context of World Trade Organization. In this paper, such requirements are discussed for clinical and chemical laboratories.